Dirigido por Cathy Yan, o longa-metragem mostra as aventuras de Arlequina na cidade Gotham, cenário dos personagens Batman e Coringa. Quando o mais terrível e narcisista vilão de Gotham, Roman Sionis (Ewan McGregor), e seu braço direito, Zsasz (Chris Messina), começam uma busca para caçar a jovem Cass (Ella Jay Basco), a cidade é virada de cabeça para baixo à procura da garota. Os caminhos de Arlequina (Margot Robbie), Caçadora (Mary Elizabeth Winstead), Canário Negro (Jurnee Smollett-Bell) e Renée Montoya (Rosie Perez) se cruzam com um único objetivo: derrubar o vilão Roman.